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細(xì)胞和組織DNA核酸免提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞和組織DNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用
本試劑盒針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織開發(fā)的專用裂解液DC,在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提取和純化。使用高效硅基DNA純化柱,高效結(jié)合基因組DNA,從而獲得純度高,產(chǎn)量高的基因組DNA。提取的基因組DNA完整性高,適合PCR、qPCR、酶切、Southern雜交、文庫構(gòu)建、克隆等。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2023-04-27
  • 訪  問  量:537
詳情介紹

細(xì)胞和組織DNA核酸免提取試劑盒

 

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織開發(fā)的專用裂解液DC,10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提取和純化。使用高效硅基DNA純化柱,高效結(jié)合基因組DNA,從而獲得純度高,產(chǎn)量高的基因組DNA。提取的基因組DNA完整性高,適合PCRqPCR、酶切、Southern雜交、文庫構(gòu)建、克隆等。

本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

 

試劑盒組成

組分

Col-D010150T

編號(hào)

裂解液DC

35 mL

Col-D0101A

洗滌液DCW1

25 mL

Col-D0101B

洗滌液DCW2

12 mL

Col-D0101C

洗脫液C

5 mL


DNA純化柱

50

Col-D0101E

備注:第一次使用前,在洗滌液DCW2中加入48mL無水乙醇,并標(biāo)記"和時(shí)間,避免重復(fù)加入。

 

保存條件

室溫保存一年。

 

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、DNase和無RNase離心管、RNaseA10mg/mL,或貨號(hào)QR0101

 

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取DNA

1.1.1 20-100mg樣本放入液氮中充分研磨,加入700μL裂解液DC,充分混勻,室溫作用1分鐘。

20-100mg樣本加入700μL裂解液DC,加入1顆鋼珠,放入組織研磨器中,研磨1-2分鐘。

備注:不同樣本中RNA含量差異很大,過多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞,最終導(dǎo)致RNA提取量下降。1.1.2 55℃孵育1分鐘。

1.1.3 12,000rpm離心1分鐘。取500μL上清。

1.1.4 (選做)加入5μL RNase A10mg/mL),室溫靜置5-10分鐘。

1.1.5 加入250μL無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

 

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取DNA

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),加入500μL裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),加入700μL裂解液DC。輕輕吹打混勻,55℃孵育1分鐘。

1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),650μL上清。

1.2.5(選做)加入5μL RNase A10mg/mL),室溫靜置5-10分鐘。

1.2.6 加入0.5倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

 

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取DNA

1.3.1 yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),加入500μL裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻,55℃孵育1分鐘。

1.3.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.3.4 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),650μL上清。

1.3.5 (選做)加入5μL RNase A10mg/mL),室溫靜置5-10分鐘。

1.3.6 加入0.5倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

 

2. DNA純化

2.1 全部轉(zhuǎn)移到DNA純化柱中,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.2 DNA純化柱中加入500μL洗滌液DCW1,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

2.3 DNA純化柱中加入500μL洗滌液DCW2,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3一次。

2.5 12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.6 DNA純化柱放入新DNase和無RNase離心管,加入30-50μL 洗脫液C,室溫放置1分鐘。

2.7 12,000rpm離心2分鐘,得到DNA溶液,-80℃保存。

 

注意事項(xiàng)

1. 經(jīng)常更換手套,防止DNA污染。

2. 使用無DNaseRNase的吸頭和離心管,防止DNA降解。

3. 常更換吸頭,防止交叉污染。

4. 動(dòng)作輕柔,防止基因組DNA斷裂。

5. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液C置于65℃水浴后再使用。

 

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