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快速RNA免提取SYBR Green熒光PCR檢測試劑盒

簡要描述:本試劑盒中采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒RNA,適用于以RNA為模板的定量PCR的檢測。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒RNA的提取。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2023-04-27
  • 訪  問  量:843
詳情介紹

快速病毒RNA免核酸提取

SYBR Green熒光PCR檢測試劑

 

試劑盒簡介:本試劑盒中采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒RNA,適用于以RNA為模板的定量PCR的檢測。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒RNA的提取。

 

試劑盒組成

組分

M-DNA01

RNA-Lysis

         1.5 mL      50T

2×one step SYBR Green Mix

200 μL       ( 50T )

SYBR Green Enzyme

50 μL         ( 50T )

樣品稀釋液

20  ml         ( 50T )

保存-20oC 保存,保存期一年。

注意:使用前將RNA-Lysis室溫充分混勻。

準(zhǔn)備的儀器:離心機(jī)、移液器、PCR儀

使用方法

一、 樣品的處理方法

1.少量樣本處理方法

1吸取15μL樣本放入1.5ml離心管中。

2)加入25 μL RNA Lysis

3)充分混勻,室溫靜置5分鐘,加入350µL樣品稀釋液混勻。

410,000rpm離心1分鐘,1-2μL作為PCR反應(yīng)模板。

2.大量樣本處理方法

1分別吸取15μL不同的樣本依次放入8聯(lián)管中。

2)加入25 μL RNA Lysis。

3)充分混勻,室溫靜置5分鐘,10,000rpm離心1分鐘。

4分別從(3)中吸取10μL處理后樣品依次加入一新的8聯(lián)管。

5每孔分別加入90µL樣品稀釋液混勻。取1-2μL作為熒光PCR反應(yīng)模板。

二、在RNase free 的離心管中配制PCR反應(yīng)體系(以ROCH 480 為測試機(jī)型)

PCR反應(yīng)體系

20 μL體系(推薦)

2×one step SYBR Green Mix

10 μL

SYBR Green Enzyme

1μL

Forward Primer (10 μM)

0.4-1μL

Reverse Primer (10 μM)

0.4-1 μL

Template RNA

1-2 μL

ddH2O

補(bǔ)足至20 μL

 

三、反應(yīng)程序


溫度

時間

循環(huán)數(shù)

逆轉(zhuǎn)錄

50oC

15min

1

預(yù)變性

95oC

30sec

1

循環(huán)反應(yīng)

95oC

10sec

 

40-45

60oC

30sec

 

溶解曲線

95oC

5sec

1

55oC

1min

1

97oC

-

1

     對于有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的模板,可以將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到55oC,有助于提高擴(kuò)增效率;

延伸時間請根據(jù)使用儀器所需要的數(shù)據(jù)采集最短時間進(jìn)行調(diào)整;

溶解曲線的設(shè)定,根據(jù)儀器的默認(rèn)采集程序設(shè)定即可。

 

注意事項

1)在進(jìn)行大量樣品檢測時,可將本試劑盒的試劑預(yù)分裝到8聯(lián) PCR管,用多通道移液器進(jìn)行多樣本的處理。

2)取樣的細(xì)胞量應(yīng)當(dāng)適中,濃度不宜過高或過低,處理后溶液應(yīng)當(dāng)以透明為宜。擴(kuò)增病毒基因時需要根據(jù)病毒的滴度決定取樣的細(xì)胞數(shù)量。

3)樣品處理過程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染,推薦設(shè)置陰性樣品參與處理過程,以檢測環(huán)境的污染。

4)PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測Tm值減去5℃,或者通過梯度PCR摸索最佳退火溫度。

5)用本試劑盒處理的樣品可于-20℃保存 1個月。

6)為防止試劑盒污染,請勿將不同批號試劑盒混用。


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