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呋喃代謝物四合一ELISA檢測試劑盒組織蜂蜜

簡要描述:呋喃代謝物四合一ELISA檢測試劑盒組織蜂蜜版采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中呋喃代謝物的殘留量。定量檢測組織、蜂蜜樣品中呋喃代謝物的殘留。

  • 產(chǎn)品型號:呋喃代謝物四合一
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2019-01-23
  • 訪  問  量:862
詳情介紹

一、原理

呋喃代謝物四合一ELISA檢測試劑盒組織蜂蜜采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品呋喃代謝物殘留量。

二、適用范圍

定量檢測組織、蜂蜜樣品中呋喃代謝物的殘留。

三、呋喃代謝物四合一ELISA檢測試劑盒組織蜂蜜特點及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測 時 間 :40min-70min

* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值<0.05 ppb;

樣本

檢測下限

回收率

呋喃唑酮

0.2ppb

70%-120%

  呋喃西林

0.2ppb

70%-120%

呋喃它酮

0.1ppb

70%-120%

呋喃妥因

0.2ppb

70%-120%

試劑盒檢測樣本的靈敏度、準(zhǔn)確度和特異性

 

藥物名稱

交叉反應(yīng)率(%)

呋喃唑酮

100%

     呋喃西林

100%

呋喃它酮

100%

呋喃妥因

100%

、所需材料

儀器微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、均質(zhì)器、振蕩器、氮吹儀、離心機(jī)、刻度移液管(10 mL)、天平(感量0.01 g)、離心管(5 mL, 50 mL)

微量移液器:10 µL~100µL、100 µL~1000µL

試劑:乙酸乙酯去離子水、 濃鹽酸 、氫氧化鈉

、 試劑盒組成

組成部分

96T裝量

1

呋喃酶標(biāo)板

96×4

2

呋喃標(biāo)準(zhǔn)品*5

0.5-1mL

3

呋喃酶標(biāo)物

40mL

4

呋喃抗體

7mL*4

5

底物A液

28mL

6

底物B液

28 mL

7

終 止 液

28mL

8

       20×濃縮洗滌液

160 mL

9

2×呋喃樣品稀釋液

160 mL

10

呋喃衍生化試劑

40 mL

注*:標(biāo)準(zhǔn)品A、B、C、D、E

喃它酮標(biāo)準(zhǔn)品:0,0.05,0.15,0.45,1.35ppb;

喃妥因標(biāo)準(zhǔn)品:0,0.1,0.3,0.9,2.7ppb;

呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品:0,0.1,0.3,0.9,2.7ppb;

呋喃西林標(biāo)準(zhǔn)品:0,0.1,0.3,0.9,2.7ppb;A、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL,其余各0.5mL,直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

   用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積   比進(jìn)行稀釋,用于酶標(biāo)板的洗滌,洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月,用前一天取出回溫。

配液2:  1×呋喃樣品稀釋液     

   用去離子水將2×呋喃樣品稀釋液  按1:1體積比進(jìn)行稀釋,用于樣本的稀釋,配好后在4℃環(huán)境可保存六個月,用前一天取出回溫。

配液3:  0.1 M HCl

   量取860 μL濃鹽酸加去離子水/雙蒸水混勻定容至100 mL,濃鹽酸揮發(fā)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

配液4:  0.1 M NaOH

    稱取0.4g 氫氧化鈉加去離子水溶解至100ml。

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知:

① 處理完的樣品應(yīng)及時進(jìn)行下步檢測,實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。

動物組織、蜂蜜 (稀釋倍數(shù):2

  ① 稱取2.0±0.05g均質(zhì)后的樣本,加入8ml

  0.1 M HCl 和400μL 呋喃衍生化試劑,用振蕩器充分振蕩1min;

    ② 置于37 ℃過夜孵育(大約16h);

 分別加入8 ml 0.1 M NaOH和20ml乙酸乙酯,用振蕩器劇烈振蕩30s;

 4000r/min,室溫(20~25℃/68-77℉)離心5min;

 取上層10ml乙酸乙酯相至離心管中,于50~60℃氮氣流下吹干;

 加入1.6 ml 1×呋喃樣品稀釋液(動物組織、蜂蜜)用渦旋儀渦動60s使干燥物溶解,用于分析。

、 酶標(biāo)免疫測定程序

  • 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,待其*回  升至室溫(20~25℃)后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  •  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
  •  按下列方式點板

  呋喃唑酮、呋喃西林:

(1)加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、酶、抗體:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL 到對應(yīng)的微孔中,加入呋喃酶標(biāo)物50µL /孔, 再加入呋喃唑酮/呋喃西林抗體50µL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板37℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。

(2)洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,加入洗滌工作液250 µL/孔,每次靜置20s,甩去孔內(nèi)液體,重復(fù)洗滌3次,后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。

(3)顯色:加入底物液A液50 µL/孔,再加底物液B液50 µL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。

(4)測定:加入終止液50µL/孔,用酶標(biāo)儀立即  測定雙波長450/630nm吸光度值。

呋喃它酮、呋喃妥因:

(1)加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、抗體:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品100µL

到對應(yīng)的微孔中,再加入呋喃它酮/妥因抗體50µL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃反應(yīng)30min。

(2)洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,加入洗滌工作液250µL/孔,每次靜置20s,甩去孔內(nèi)液體,重復(fù)洗滌3次,后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。

(3)加酶標(biāo)物100µL/孔,用蓋板膜蓋板后置37℃反應(yīng)30min。

(4)洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,加入洗滌工作液250µL/孔,每次靜置20s,甩去孔內(nèi)液體,重復(fù)洗滌3次,后一次用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。

(5)顯色:加入底物液A液50µL/孔,再加底物    

液B液50µL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置37℃反應(yīng)10min。

(6)測定:加入終止液50µL/孔,用酶標(biāo)儀立即測定450nm處的吸光度值(建議用雙波長450/630nm)檢測。

、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以呋喃標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃實際濃度。(詳見試劑盒專業(yè)分析軟件,以便進(jìn)行大量樣本的分析計算。)

、 注意事項

洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作

反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

不使用過了有效期的試劑盒,不交換使用不同批號的試劑。

④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15min即可。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時間到20-30min,反之則減短反應(yīng)時間。

 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務(wù)部。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件: 28

保 質(zhì) 期: 12個月

十二、問題與對策

序號

現(xiàn)象

可能原因

解決方法

1

板條不顯色或者無相應(yīng)數(shù)值

試劑使用順序混亂,或操作步驟出錯

嚴(yán)格遵循實驗說明重復(fù)實驗

使用了不同批次的試劑

確保試劑來自同一試劑盒

板條受潮嚴(yán)重

板條要封好,干燥劑失效要及時更換

 

 

 

 

2

 

 

 

OD

 

試劑過期,或者不同的批次混用

查證過期試劑和批次

洗液配制錯誤、洗滌浸泡時間過長

按照說明書要求洗滌,并正確配制洗液

孵育時間過短

按照說明書要求,嚴(yán)格計算好時間

試劑污染

確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿

試劑溫度過低

根據(jù)試劑體積大小回溫時間相應(yīng)延長,確保試劑*回溫

使用錯誤波長讀數(shù),或者酶

標(biāo)儀失靈

確保450nm波長讀數(shù),檢查酶標(biāo)儀是否故障

試劑盒處于的條件

使用完畢的部分請立即放回冰箱,勿置于過熱環(huán)境時間太長

 

 

3

過高的

背景值或吸光度(OD值)

使用了質(zhì)量差的水配制試劑

使用雙蒸水或去離子水配制試劑

洗滌不當(dāng)或者洗板機(jī)洗板效果不好

增加1-2次洗滌,每孔至少加入250μL洗液

酶標(biāo)儀失靈,如OD值讀數(shù)很高而顏色很淺

使用校正微孔板檢查酶標(biāo)儀,檢查光源

實驗室溫度過高,反應(yīng)時間過長

測定操作溫度是否合適,時間是否計算正確

試劑混淆,被污染或者配制不當(dāng)

確保使用正確的試劑,準(zhǔn)確配制,避免污染

 

4

 

內(nèi)

差異性

加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的時間不*

使用多道槍加樣,同種試劑加樣途中不能中斷

多道槍使用不當(dāng)

校準(zhǔn)多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量*

洗滌系統(tǒng)出現(xiàn)故障

檢查洗滌系統(tǒng),保持良好運行

 

 

 

5

 

板與板之間孵育時間相差太大

獨立計時,確保*的孵育時間

板與板之間不*的洗滌過程

確保相同的洗滌次數(shù),保證洗滌系統(tǒng)正常運作

使用移液槍不當(dāng)

檢查移液槍,確保吸取相同液量

試劑和樣品處于不同溫度

確保盒內(nèi)試劑和樣品液等充分回溫,如果試劑體積較大則需要回溫較長時間。不能用溫水浴回溫樣品

不同批次的試劑混用,或試劑盒過期

試劑不要混用,通常0標(biāo)準(zhǔn)品的OD值小于0.5顯示試劑質(zhì)量下降

 

 

6

一個或多個標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)點出曲線范圍

標(biāo)準(zhǔn)品添加順序混亂,或者放置于錯誤位置

按照說明要求重復(fù)實驗,保證標(biāo)準(zhǔn)品添加正確。

標(biāo)準(zhǔn)品被污染或與其他標(biāo)準(zhǔn)品混淆

改用新的標(biāo)準(zhǔn)品,按照由低濃度到高濃度的順序添加標(biāo)準(zhǔn)品

洗滌不*或者洗滌系統(tǒng)失靈

遵循一如既往的洗滌方式,檢查洗滌系統(tǒng)

加入標(biāo)準(zhǔn)品和試劑的時間不*

由低到高濃度依次添加標(biāo)準(zhǔn)品,使用多道槍移液

多道槍使用不當(dāng)

校準(zhǔn)多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量*

 

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