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經(jīng)典豬瘟液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

簡(jiǎn)要描述:經(jīng)典豬瘟液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒【用途】
檢測(cè)豬血清中的經(jīng)典豬瘟抗體,適用于動(dòng)物疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)等。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2022-04-07
  • 訪  問  量:874
詳情介紹

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:經(jīng)典豬瘟液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

【規(guī)格】96T×2

【用途】

檢測(cè)血清中的經(jīng)典豬瘟抗體,適用于動(dòng)物疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)。

【儲(chǔ)藏與有效期】28保存,有效期12個(gè)月。

經(jīng)典豬瘟液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒主要組份】

序號(hào)

組份名稱

數(shù)量

1

抗原包被板

96T×2

2

HRP-單抗

12mL×1

3

樣品稀釋液

20mL×1

4

陰性對(duì)照

1.0mL×1

5

陽(yáng)性對(duì)照

1.0mL×1

6

底物AB

12mL×2

7

終止液

12mL×1

8

濃縮洗滌液(20×)

50mL×1

9

說明書

1

【試驗(yàn)操作】

1、洗滌液配制

將濃縮洗滌液(20×)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1×),即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水,配制的洗滌液(1×)作為洗板用。

2、定性檢測(cè)方案(單孔定性,每板檢測(cè)92份血清樣本)

【操作步驟】

2.1加樣:設(shè)陰性對(duì)照血清(A1B1)和陽(yáng)性血清(C1D1)2孔,直接加入50ul/孔對(duì)照血清;其它為被檢樣品孔,預(yù)先在相應(yīng)孔內(nèi)加入45ul的稀釋液,接著加入5ul/孔待檢血清;最后,在所有孔內(nèi)均加入50ulHRP-單抗,被檢血清即為120稀釋。振蕩,混勻,37℃溫育30分鐘。

2.2TMB底物:用洗滌液洗板3遍,最后一次拍干,加入TMB底物,50ul/孔,37℃溫育15分鐘。

2.3反應(yīng)終止: 加入終止液,50ul/孔,終止反應(yīng)。

2.4讀值:酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。

【計(jì)算方法】

2.5阻斷率計(jì)算

陰性對(duì)照平均值=(OD-A1+OD-B1)/2;

陽(yáng)性對(duì)照平均值=(OD+C1+OD+D1)/2;

樣品阻斷率 PI=[(陰性對(duì)照平均值-樣品OD值)/陰性對(duì)照平均值]×100%

根據(jù)以上公式計(jì)算被檢樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品的阻斷率。

  2.6試驗(yàn)成立

   兩孔陰性對(duì)照OD450nm值至少一孔OD值大于0.5;兩孔陽(yáng)性對(duì)照至少一孔的阻斷率大于60%。

【結(jié)果判定】

被檢樣品PI≥50%判為口蹄疫病毒O型抗體陽(yáng)性;PI<50%判為口蹄疫病毒O型抗體陰性。

3、檢測(cè)方案(每板檢測(cè)1020份血清樣本)

在使用前,所有的試劑盒組份應(yīng)恢復(fù)到室溫。試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩混勻。每個(gè)樣品使用一個(gè)單獨(dú)的吸頭。

3.1樣品稀釋: 取出抗原包被板,根據(jù)不同的需要,選擇圖1或圖2中的一種布局進(jìn)行操作。圖1為可檢測(cè)10份樣品布局圖;圖2為可檢測(cè)20份樣品布局圖。每次試驗(yàn),每板均需設(shè)置陰陽(yáng)性血清對(duì)照及4孔不加血清單抗對(duì)照。

以圖1為例操作,A1A10每孔各75µL稀釋液,其它所有孔內(nèi)各加入50µL的稀釋液。A1A10每孔各加25µL待檢樣品A1150µL的陽(yáng)性對(duì)照,A1250µL的陰性對(duì)照,用排槍吹打混勻(每孔吹打35次),待檢樣品A1A10分別50µL/的量從AH連續(xù)2倍稀釋;陽(yáng)性對(duì)照A1150µL/的量從AH連續(xù)2倍稀釋;陰性對(duì)照A1250µL/的量從AB連續(xù)2倍稀釋。待檢樣品在第110列從1:4稀釋至1:512;陽(yáng)性對(duì)照,從1:2稀釋至1:256,由于試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照已1:4稀釋,則變?yōu)閺?/span>1:8稀釋至1:1024;陰性對(duì)照,從1:2稀釋至1:4。

3.2 加入HRP-單抗:樣品稀釋好后,在所有孔內(nèi)加入50ulHRP-單抗,反應(yīng)體系即為100µL/。加樣完畢后,所有稀釋度翻倍,待檢樣品從1:81:1024,陽(yáng)性對(duì)照從1:161:2048,陰性對(duì)照從1:41:8,貼封板膜,振蕩混勻。將加好樣的ELISA反應(yīng)板置于37溫育30分鐘。

3.3洗板:230μL±20μL)洗滌液(1×)洗滌板孔,共洗滌3次。每次洗滌后應(yīng)棄去孔內(nèi)的液體。在最后一次洗滌液棄去后,將孔中殘留的洗滌液拍干。50μL/孔加入TMB底物,37避光溫育1015min。

3.4讀值: 每孔再加50μL終止液終止反應(yīng),立即在450nm波長(zhǎng)下讀取OD值。

1  96孔板檢測(cè)10份樣品布局圖


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:8

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:16










1:32

1:8

C

1:32










1:64

空白

D

1:64










1:128

空白

E

1:128










1:256

不加血清單抗

對(duì)照

F

1:256










1:512

G

1:512










1:1024

H

1:1024










1:2048

2  96孔板檢測(cè)20份樣品布局圖


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:16

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:32










1:32

1:8

C

1:64










1:64

空白

D

1:128










1:128

空白

E

S11 1:16

S12

S13

S14

S15

S16

S17

S18

S19

S20

1:256

不加血清單抗

對(duì)照

F

1:32










1:512

G

1:64










1:1024

H

1:128










1:2048

【結(jié)果分析】

3.5試驗(yàn)成立判斷

不加血清單抗對(duì)照OD值應(yīng)在2.0±1.5范圍內(nèi);

陽(yáng)性對(duì)照抗體效價(jià)不低于1:1024±1滴度;

陰性對(duì)照抗體效價(jià)應(yīng)<1:8。

3.6結(jié)果判定

不加血清單抗對(duì)照4孔,棄去最高和OD值,計(jì)算剩余2孔的平均OD值,再除以2,即得50%對(duì)照值,該值即為臨界值,表示阻斷50%反應(yīng)的對(duì)照OD值。待檢樣品OD臨界值,判為陰性孔;待檢樣品OD臨界值,判為陽(yáng)性孔。每份待檢樣品系列梯度稀釋中,陽(yáng)性孔的最高稀釋倍數(shù)即為該待檢樣品的抗體效價(jià)。若臨界值處于兩個(gè)稀釋孔OD值之間,抗體效價(jià)取相鄰陽(yáng)性孔和陰性孔稀釋倍數(shù)的反對(duì)數(shù)中間值。如臨界值處于1:64(反對(duì)數(shù)值為1.8)與1:128(反對(duì)數(shù)值為2.1)之間,則判定該份待檢樣品的抗體效價(jià)為1:90(反對(duì)數(shù)值為1.95)。

抗體效價(jià)≥64,為疫苗免疫合格。

抗體效價(jià)計(jì)算對(duì)照表(反對(duì)數(shù)值)

抗體效價(jià)

Log10(效價(jià))

對(duì)照計(jì)算

抗體效價(jià)

Log10(效價(jià))

對(duì)照計(jì)算

抗體效價(jià)

Log10(效價(jià))

對(duì)照計(jì)算

1:4

0.6

1:32

1.5

1:256

2.4

1:6

0.75

1:45

1.65

1:360

2.55

1:8

0.9

1:64

1.8

1:512

2.7

1:11

1.05

1:90

1.95

1:720

2.85

1:16

1.2

1:128

2.1

1:1024

3

1:22

1.35

1:180

2.25

1:1440

3.15

4、注意事項(xiàng)

4.1 為使您的實(shí)驗(yàn)獲得正確結(jié)果,請(qǐng)您在實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本說明書。

4.2 所有試劑使用前恢復(fù)至室溫(1826),以免溫度過低影響抗原抗體反應(yīng)。

4.3實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用溫度計(jì)檢查溫箱溫度,溫度過高或過低影響OD值高低。

4.4 包被板反應(yīng)時(shí)嚴(yán)禁堆疊放置,應(yīng)該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。

4.5實(shí)驗(yàn)所用移液器及設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)。

4.6采集的樣品要新鮮,并且最好不要溶血。血清標(biāo)本在28放置不要超過2天,室溫不超過8小時(shí),如需長(zhǎng)時(shí)間放置應(yīng)儲(chǔ)存于-20



長(zhǎng)期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

長(zhǎng)期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)


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