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快速DNA、RNA免核酸提取熒光PCR檢測(cè)試劑盒

簡(jiǎn)要描述:本試劑盒中采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒DNA/RNA。該DNA/RNA無需進(jìn)行純化可以直接用于TaqMan等熒光標(biāo)記探針的高特異性檢測(cè)。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒DNA/RNA的提取。2×q PCR Mix、5×one step qRT- PCR Mix試劑中均引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng),可消除擴(kuò)增污染對(duì)qPCR的影響。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2023-04-27
  • 訪  問  量:733
詳情介紹

快速病毒DNA/RNA免核酸提取

熒光PCR檢測(cè)試劑

試劑盒簡(jiǎn)介:本試劑盒中采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需重復(fù)離心便可獲得高質(zhì)量的病毒DNA/RNA。該DNA/RNA無需進(jìn)行純化可以直接用于TaqMan等熒光標(biāo)記探針的高特異性檢測(cè)。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞培養(yǎng)液、血液、血清中病毒DNA/RNA的提取。2×q PCR Mix、5×one step qRT- PCR Mix試劑中均引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng),可消除擴(kuò)增污染對(duì)qPCR的影響。

試劑盒組成

組分

M-DNA01

DNA/RNA-Lysis

         1.5 mL      50T

q PCR Mix

500 μL       ( 50T )

5×one step qRT- PCR Mix

200 μL       ( 50T )

樣品稀釋液

20  ml         ( 50T )

保存-20oC 保存,保存期一年。

注意:使用前將DNA/RNA-Lysis室溫充分混勻。

準(zhǔn)備的儀器:離心機(jī)、移液器、PCR儀

使用方法

一、 樣品的處理方法

1.少量樣本處理方法

1吸取15μL樣本放入1.5ml離心管中。

2)加入25 μL DNA/RNA Lysis。

3)充分混勻,室溫靜置5分鐘,加入350µL樣品稀釋液混勻。

410,000rpm離心1分鐘,1-2μL作為PCR反應(yīng)模板。

2.大量樣本處理方法

1分別吸取15μL不同的樣本依次放入8聯(lián)管中。

2)加入25 μL DNA/RNA Lysis。

3)充分混勻,室溫靜置5分鐘,10,000rpm離心1分鐘。

4分別從(3)中吸取10μL處理后樣品依次加入一新的8聯(lián)管。

5每孔分別加入90µL樣品稀釋液混勻。取1-2μL作為熒光PCR反應(yīng)模板。

二、DNA為模板的PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序

PCR反應(yīng)體系

20 μL體系(推薦)

q PCR Mix

10 μL

Forward Primer (10 μM)

0.4-1μL

Reverse Primer (10 μM)

0.4-1 μL

TaqMan Probe

0.4-1 μL

Template DNA

1 μL

ddH2O

補(bǔ)足至20 μL

 

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

37oC

2min

1

95oC

5min

1

95oC

10sec

 

40-45

60oC

30sec

 

三、RNA為模板的PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序

PCR反應(yīng)體系

20 μL體系(推薦)

5×one step qRT- PCR Mix

4μL

Forward Primer (10 μM)

0.4-1μL

Reverse Primer (10 μM)

0.4-1 μL

TaqMan Probe

0.4-1 μL

Template RNA

1-2 μL

ddH2O

補(bǔ)足至20 μL

 

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

55oC

15min

1

95oC

30sec

1

95oC

10sec

 

40-45

60oC

30sec

 

注意事項(xiàng)

1)在進(jìn)行大量樣品檢測(cè)時(shí),可將本試劑盒的試劑預(yù)分裝到8聯(lián) PCR管,用多通道移液器進(jìn)行多樣本的處理。

2)取樣的細(xì)胞量應(yīng)當(dāng)適中,濃度不宜過高或過低,處理后溶液應(yīng)當(dāng)以透明為宜。擴(kuò)增病毒基因時(shí)需要根據(jù)病毒的滴度決定取樣的細(xì)胞數(shù)量。

3)樣品處理過程中應(yīng)當(dāng)防止交叉污染,推薦設(shè)置陰性樣品參與處理過程,以檢測(cè)環(huán)境的污染。

4)PCR的退火溫度可根據(jù)引物的預(yù)測(cè)Tm值減去5℃,或者通過梯度PCR摸索最佳退火溫度。

5)用本試劑盒處理的樣品可于-20℃保存 1個(gè)月。

6)為防止試劑盒污染,請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。

 


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